1.金相顯微鏡的成像原理,
金相顯微鏡的成象放大部分主要由兩組透鏡組成。靠近觀察物體的透鏡叫物鏡,而靠近眼睛的透鏡叫目鏡。通過物鏡和目鏡的兩次放大,就能將物體放大到較高的倍數(shù),見圖1,顯微鏡的放大光學(xué)原理圖。物體AB置于物鏡前,離其焦點略遠處,物體的反射光線穿過物鏡折射后,得到了一個放大的實象A1B1,若此象處于目鏡的焦距之內(nèi),通過目鏡觀察到的圖象是目鏡放大了的虛象A2B2。
2.金相顯微鏡的放大倍數(shù)
物鏡的放大倍數(shù)M物=A1B1/AB≈L╱F1
目鏡的放大倍數(shù)=A2B2/A1B1≈D╱F2
兩式相乘:M物×M目=A1B1/AB×A2B2/A1B1=A2B2/AB
=L╱F1×D╱F2=L×250╱F1×F2=M總
式中:L—為光學(xué)鏡筒長度(即物鏡后焦點到目鏡前焦點的距離)
F1—物鏡的焦距。 F2—目鏡的焦距
D—明視距離(人眼的正常明視距離為250mm)
即顯微鏡總的放大倍數(shù)等于物鏡放大倍數(shù)和目鏡放大倍數(shù)的乘積。一般金相顯微鏡的放大倍數(shù)最高可達1600到2000倍。
由此可看出:因為L光學(xué)鏡筒長度為定值,可見物鏡的放大倍數(shù)越大,其焦距越短。在顯微鏡設(shè)計時,目鏡的焦點位置與物鏡放大所成的實象位置接近,并使目鏡所成的最終倒立虛象在距眼睛250毫米處成象,這樣使所成的圖象看得很清楚。
顯微鏡的主要放大倍數(shù)一般通過物鏡來保證,物鏡的最高放大倍數(shù)可達100倍,目鏡的最高放大倍數(shù)可達25倍。放大倍數(shù)分別標(biāo)注在物鏡和目鏡各自的鏡筒上。在用金相顯微鏡觀察組織時,應(yīng)根據(jù)組織的粗細情況,選擇適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù),以使組織細節(jié)部分能觀察清楚為準(zhǔn),不要只追求過高的放大倍數(shù),因為放大倍數(shù)與透鏡的焦距有關(guān),放大倍數(shù)越大,焦距越小,會帶來許多缺陷。
3.透鏡象差:
透鏡象差就是透鏡在成象過程中,由于本身幾何光學(xué)條件的限制,圖象會產(chǎn)生變形及模糊不清的現(xiàn)象。透鏡象差有多種,其中對圖象影響最大的是球面象差、色象差和象域彎曲三種。
顯微鏡成象系統(tǒng)的主要部件為物鏡和目鏡,它們都是由多片透鏡按設(shè)計要求組合而成,而物鏡的質(zhì)量優(yōu)劣對顯微鏡的成象質(zhì)量有很大影響。雖然在顯微鏡的物鏡、目鏡及光路系統(tǒng)等設(shè)計制造過程中,已將象差減少到很小的范圍,但依然存在。
(1)球面象差:
1)產(chǎn)生原因:球面象差是由于透鏡的表面呈球曲形,來自一點的單色光線,通過透鏡折射以后,中心和邊緣的光線不能交于一點,靠近中心部分的光線折射角度小,在離透鏡較遠的位置聚焦,而靠近邊緣處的光線偏折角度大,在離透鏡較近的位置聚焦。所以形成了沿光軸分布的一系列的象,使圖象模糊不清。這種象差稱球面象差,見圖2所示。
2)校正方法:
a 采用多片透鏡組成透鏡組,即將凸透鏡與凹透鏡組合形成復(fù)合透鏡,產(chǎn)生性質(zhì)相反的球面象差來減少。
b 通過加光欄的辦法,縮小透鏡的成象范圍。因球面象差與光通過透鏡的面積大小有關(guān)。
在金相顯微鏡中,球面象差可通過改變孔徑光欄的大小來減小??讖焦鈾谠酱?,通過透鏡邊緣的光線越多,球面象差越嚴(yán)重。而縮小光欄,限制邊緣光線的射入,可減少球面象差。但光欄太小,顯微鏡的分辨能力降低,也使圖象模糊。因此,應(yīng)將孔徑光欄調(diào)節(jié)到合適的大小。
(2)色象差:
1)產(chǎn)生原因:色象差的產(chǎn)生是由于白光是由多種不同波長的單色光組成,當(dāng)白光通過透鏡時,波長愈短的光,其折射率愈大,其焦點愈近。而波長越長,折射率越小,其焦點愈遠,這樣一來使不同波長的光線,形成的象不能在同一點聚焦,使圖象模糊所引起的象差,即色象差。見圖3所示。
2)校正方法:可采用單色光源或加濾色片或使用復(fù)合透鏡組來減少。
(3)象域彎曲:
1)產(chǎn)生原因:垂直于光軸的平面,通過透鏡所形成的象,不是平面而是凹形的彎曲象面。稱象域彎曲。見圖4所示。
2)校正辦法:象域彎曲的產(chǎn)生,是由于各種象差綜合作用的結(jié)果。一般的物鏡或多或少地存在著象域彎曲,只有校正極佳的物鏡才能達到趨于平坦的象域。
4.物鏡的數(shù)值孔徑
物鏡的數(shù)值孔徑用NA表示(即Numderical Apertuer),表示物鏡的聚光能力。數(shù)值孔徑大的物鏡,聚光能力強,即能吸收更多的光線,使圖象更加明顯,物鏡的數(shù)值孔徑NA可用公式表示為:
NA=n·sin φ
其中:n—是物鏡與樣品間介質(zhì)的折射率
φ—通過物鏡邊緣的光線與物鏡軸線所成角度,即孔徑半角。
可見,數(shù)值孔徑的大小,與物鏡與樣品間介質(zhì)n的大小有關(guān),以及孔徑角的大小有關(guān)。見圖5所示。
當(dāng)物鏡與物體之間的介質(zhì)為空氣時,
光線在空氣中的折射率為n=1,
若物鏡的孔徑半角為30º,
則數(shù)值孔徑為:
NA=n sinφ=1×sin30º=0.5
若物鏡與物體之間的介質(zhì)為松柏油時,
介質(zhì)的折射率n=1.52,
則其數(shù)值孔徑為:
NA=n sinφ=1.52×sin30º=0.76
物鏡在設(shè)計和使用中,指定以空氣為介質(zhì)的稱干系物鏡或干物鏡,以油為介質(zhì)的稱為油浸系物鏡或油物鏡。干物鏡的n=1,sinφ值總小于1,故數(shù)值孔徑NA小于1,油物鏡因n=1.5以上,故數(shù)值孔徑NA大于1。物鏡的數(shù)值孔徑的大小,標(biāo)志著物鏡分辨率的高低,即決定了顯微鏡分辨率的高低。